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    你知道吗?PCR盖紧了盖子,也有可能出现试剂蒸发

    导读

    在PCR实验中,我们加完反应体系后,都会认真仔细的盖好盖子,并反复确认已经盖好了盖子,以避免出现试剂蒸发的情况??墒怯惺焙蛭颐且不嵊幸恍┮苫螅好髅饕丫啡细亲痈墙袅?,实验结束后,还是会出现试剂蒸发的现象。这是为什么呢?

    其实试剂的蒸发是PCR实验中常见的问题之一,影响试剂蒸发的因素也比较多。

    蒸发是指试剂在PCR实验过程中,反应液在高温下气化,又凝结在管壁或顶盖上,形成水雾或水珠,或直接从管盖或覆膜的气隙中溢出,造成反应液浓度变化、反应液量减少,有的甚至蒸干,导致实验无效等。

    影响试剂蒸发的因素主要有以下三点:

    01热盖压力、温度

    在PCR实验中,我们一般通过加热盖的办法来防止试剂蒸汽的凝结,热盖温度一般比反应液的温度高,以防止蒸汽凝结。

    PCR 仪的热盖大致可以分为以下四种:非可调式热盖、可调节式热盖、自适应式热盖和自动式热盖。而可调节式热盖利用手拧压紧式,拧不紧会发生试剂蒸发,通过增加热盖压力可以尽量减少边缘蒸发的现象。有时拧得过紧反而可能出现压坏管子、拧坏旋钮的情况。通常,采用电动智能热盖,能够自动感应不同高度的耗材,自动压紧耗材,压力均匀且恒定,从而能够减少试剂蒸发和人工误差,提高实验准确度和可重复性。

    02耗材形变

    对于蒸汽的泄漏,大部分人认为是热盖的压力不够所致。热盖的压力固然很重要,但这仅仅是一个方面,其实耗材也很关键。

    PCR 孔板通常为塑料材质,在受热后发生膨胀,产生较大地变形,用于放置 PCR 孔板的 PCR 金属基座则受热膨胀率极小,PCR 孔板受热膨胀后不能正常沿平面延展进而中间形成拱起状态,从而造成上方热盖不能全面地与 PCR 孔板上表面充分接触,造成温度、压力不均,引起 PCR 孔板边缘试剂的蒸发,影响 PCR 检测效果。

    03耗材密封不严

    热盖与耗材压紧并不等于盖紧了 PCR 管盖,PCR 孔板质量参差不齐。优质的耗材,管口和盖子表面光滑,盒盖后密封性好,不易泄漏。而劣质耗材,管口不平,有径向纹路,容易造成泄漏,甚至蒸干。

    因此在PCR实验中,尽量选择优质、合适的耗材。同时也可以扩大反应体系,尽量减少体系蒸发对反应的影响。



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